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博碩士論文 etd-0829103-110619 詳細資訊
Title page for etd-0829103-110619
論文名稱
Title
利用NMR研究一種新蛇毒蛋白分子CTXn之結構與動力學
Structure and Dynamics of a Novel Cobra Cardiotoxin CTXn as Derived from Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy
系所名稱
Department
畢業學年期
Year, semester
語文別
Language
學位類別
Degree
頁數
Number of pages
128
研究生
Author
指導教授
Advisor
召集委員
Convenor
口試委員
Advisory Committee
口試日期
Date of Exam
2003-07-29
繳交日期
Date of Submission
2003-08-29
關鍵字
Keywords
動力學、核磁共振、CTXn、結構
NMR, CTXn, Dynamics, Structure
統計
Statistics
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中文摘要
摘要
近年來,NMR已成為解DNA、多胜肽及蛋白質結構之重要的方法。台灣眼鏡蛇蛇毒(snake venom)的研究在台灣至今已有九十餘年歷史。蛇毒是經由毒蛇的唾液中所抽取的具多組成的混合物,其中包含有神經毒蛋白(neurotoxin )及薄膜毒蛋白(membrane toxin)兩類。雖然,神經毒蛋白及薄膜毒蛋白兩類毒蛋白是相似的同源蛋白(homologous),且源自同一原始基因(ancestralgene);但兩者在藥理活性(pharmacological activity)及免疫(immunology)性質上卻完全不相同。這是因為兩者之三維空間結構的差異而導致,但礙於單晶養成不易致使無X-ray數據來相比較。這些結構之確定需要核磁共振技術。近年來已有多種心臟毒蛋白之水溶液結構被解出。最近又發現了一種新的心臟毒蛋白CTXn,其結構尚未被報導。故本篇以NMR二維磁共振光譜技術:DQF-COSY,COSY,TOCSY;NOESY以尋得新心臟毒蛋白結構,並利用利用縱向(T1)、橫向鬆弛時間(T2)之測量探討其動態研究。結果表明CTXn之三度空間結構是以β sheet為骨架,其包含一雙股β反平行折板和三股β反平行折板結構與四對雙硫鍵。此外,CTXn之整體運動相關時間為ns量級;快運動相關時間為ps時間尺度範圍;β折板處的運動比無規環處(loop)的運動要慢。





Abstract
none



目次 Table of Contents
目錄
壹、緒論………………………………………………………………..01
一、氨基酸組成簡介………………………………………………03
二、蛋白質功能簡介……………………………………………..07
三、蛋白質結構簡介………………………………………………08
四、蛇毒蛋白簡介………………………………………………..11
五、心臟毒蛋白的作用與機制…………………………………..13
貳、核磁共振………………………………………………………….16
一、歷史背景……………………………………………………...16
二、核磁共振基本原理……………………………………………18
三、鬆弛與核磁共振中的主要作用簡介………………………..21
參、蛋白質二維核磁共振光譜簡介………………………………….32
一、二維核磁共振光譜基本原理………………………………..32
二、COSY光譜………………………………………………….34
三、DQF-COSY光譜……………………………………………36
四、TOCSY光譜…………………………………………………37
五、NOESY光譜…………………………………………………40
六、分子動力學模擬……………………………………………..45
肆、二維磁共振之判定方法…………………………………………...48
一、蛋白質1H-NMR光譜之判定…………………………………48
二、氨基酸特定次序位置之判定………………………………….57
三、分子結構的限制條件………………………………………….66
四、蛋白質分子三度空間結構的尋求……………………………70
伍、蛋白質動態行為之研究………………………………………….72
一、鬆弛與運動…………………………………………………..75
二、與模型無關的方法在分子動態上的研究…………………..78
陸、實驗部分………………………………………………………82
一、實驗藥品……………………………………………………..82
二、樣品的製備…………………………………………………..82
三、儀器設備及裝置……………………………………………..82
四、磁共振實驗…………………………………………………..83
柒、結果與討論……………………………………………………….87
一、CTXn一維氫光譜…………………………………………..87
二、CTXn三度空間結構…………………………………………88
三、CTXn與同源蛋白之比較……………………………………91
四、動力學研究…………………………………………………..104
五、總結……………………………………………………………108
六、未來展望……………………………………………………..109
七、致謝…………………………………………………………..110
捌、參考文獻………………………………………………………….111



參考文獻 References
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