本篇論文是利用單光子顯微影像技術，研究染料分子的螢光影像，即是將單一波長的雷射光源，導入顯微光學系統
中，激發Rhodamine 6G染料分子，使其產生螢光，使用帶通濾光片將非螢光波長範圍的散射光濾除，並利用CCD
照相機記錄下螢光分子的影像。本實驗是利用308 nm的準分子雷射激發染料雷射產生519 nm的雷射光束，Rhodamine 6G染料分子吸收此波長之光源後，會發射波長為556 nm左右的黃綠色螢光，並由電腦分析其螢光強度
與濃度之關係。

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目 錄
論文提要…………………………………………….………Ⅰ
目錄…………………………………………...………………Ⅲ
圖目…………………………………………………………...Ⅳ
表目……………………………………………………….…. Ⅵ

壹、導論……………………………………………………..…1
一、簡介……………………………………………………1
二、共焦掃描顯微鏡簡史…………………………..…….4
三、單光子共焦掃描顯微原理……………………………6

貳、實驗步驟……………………………………………..….10
一、實驗系統…………………………………….………..10
1.顯微鏡系統……………………………………….10
2.雷射光源……………………………….…………10
3.CCD偵測系統……………………………………10
4.時序控制……………………………….…………11
5.Rhodamine 6G溶液的配製……..…………………11
二、實驗方法…………………………………………….13

參、結果與討論……………………………….………………14
1. Rhodamine 6G分子螢光的量測…….……………..….14
2. Rhodamine 6G分子螢光強度之分析……………..…..15
3. 加上穿透式光柵的效應…………………………..…..15

肆、結論………………………………….……………………17

伍、未來的發展………………………………………………19

陸、參考文獻…………………………………………………44

圖 目

圖一、共焦掃描顯微鏡成像示意圖。……………………...20
圖二、由電腦重組平面影像成3D影像之示意圖。……....21
圖三、實驗儀器間的驅動順序及脈衝長度。…………...…22
圖四、Rhodamine 6G分子結構。…………………………..23
圖五、Rhodamine 6G分子的吸收光譜。………………..24
圖六、實驗裝置圖。………………………………………...25
圖七、濃度1.0 ´ 10-6 M的螢光影像。………………….……26
圖八、濃度7.5 ´ 10-7 M的螢光影像。…………………….…27
圖九、濃度5.0 ´ 10-7 M的螢光影像。………….……………28
圖十、濃度2.5 ´ 10-7 M的螢光影像。……….………………29
圖十一、濃度1.0 ´ 10-7 M的螢光影像。…………………….30
圖十二、濃度7.5 ´ 10-8 M的螢光影像。………………….…31
圖十三、濃度5.0 ´ 10-8 M的螢光影像。……….……………32
圖十四、濃度2.5 ´ 10-8 M的螢光影像。…….………………33
圖十五、濃度1.0 ´ 10-8 M的螢光影像。…………………….34
圖十六、染料溶液螢光強度與濃度之關係( 濃度範圍10-5 M ~
10-11 M )。……………...………………….………...35
圖十七、染料溶液螢光強度與濃度之關係( 濃度範圍10-5 M ~
10-8 M )。……………...………………….………...36
圖十八、染料溶液螢光強度與濃度之關係( 濃度範圍10-6 M ~
10-7 M )。…………………………………..………...37
圖十九、染料溶液螢光強度與濃度之關係( 濃度範圍10-7 M ~
10-8 M )。…….………………………….………….. 38
圖二十、螢光通過穿透式光柵產生一級螢光之示意圖。....39
圖二十一、預期R6G分子螢光通過穿透式光柵的螢光影像圖
。………………………………………….………...40

表 目

表一、使用不同型式雷射光源之實驗對照表。………...……41

表二、顯微成像研究Rhodamine 6G的時序。...……..…….…42

表三、濃度與螢光強度實驗數據表。………………………...43

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