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博碩士論文 etd-0910107-141623 詳細資訊
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論文名稱
Title
麩胺酸脫氫酶/聚苯胺修飾之組合式超微電極在麩胺酸偵測上的應用
Application of Polyaniline-Nafion Glutamic Dehydrogenase Assembly Ultramicro-Carbon Fiber Electrode (GLDH/PAn/ NF/CFE) for detection of Glutamate
系所名稱
Department
畢業學年期
Year, semester
語文別
Language
學位類別
Degree
頁數
Number of pages
71
研究生
Author
指導教授
Advisor
召集委員
Convenor
口試委員
Advisory Committee
口試日期
Date of Exam
2007-07-30
繳交日期
Date of Submission
2007-09-10
關鍵字
Keywords
麩胺酸脫氫酶
Glutamic Dehydrogenase
統計
Statistics
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中文摘要
近年來,在生化分析上的研究,生化感測器的發展逐漸受到重視,尤其在電化學方法中,以修飾電極技術開發出的生化感測器,逐漸被用於臨床檢驗上。其具有簡單操作、價格便宜和訊號反應快速等優點。
本論文是以本實驗室開發的聚苯胺修飾技術,製成聚苯胺酵素修飾組合式超微電極(GLDH/PAn/NF/ CFE),其具有聚苯胺電極對銨離子特有的偵測能力,和酵素本身的高專一特性來進行偵測,並透過超微電極本身高訊號雜訊比的特性,可對生化電極的靈敏進一步提升。本實驗所使用的酵素為麩胺酸脫氫酶 (Glutamic Dehydrogenase, GLDH ),搭配輔酶(Nicotinamide Adenine Dinucleotide, NAD+),可與麩胺酸(Glutamate)作用,釋放出銨離子(如下式),經由聚苯胺修飾酵素電極測得,進而可間接定量麩胺酸。
L-glutamate + NAD+ + H2O 2-ketoglutarate + NADH + NH4+ 實驗結果顯示,在 FIA 系統下偵測麩胺酸,偵測極限達 1 μM,並有不錯的再現性(RSD = 1.42%, n =14)和穩定性。
Abstract
none
目次 Table of Contents
第一章 緒論............................................................................................1
1.1 前言.............................................................................1
1.2 電聚合 (Electropolymerizatio..................................3
1.3 組合式微電極 ( Assembly microeletrode ) 在電極上的優點..............................................................................7
1.4 聚苯胺及導電性聚合物簡介.....................................9
1.5 酵素簡介...................................................................12
1.6 NADH 及 GLDH 簡介..............................................14
1.7 文獻中對麩胺酸的分析............................................16
1.8 研究目的....................................................................17
第二章 聚苯胺修飾/組合式超微電極...............................18
2.1 前言...............................................................................18
2.2 實驗...............................................................................18
2.2.1 藥品與容易配製.......................................................18
2.2.2 儀器設備...................................................................20
2.2.3 自製微電極之製作...................................................23
2.2.4 聚苯胺修飾電極之製備(Pan/NF/CFE...................26
2.3 實驗流程........................................................................29
2.3.1 PAn/NF/CFE 的循環伏安圖...................................32
2.3.2 PAn/NF/CFE 對 NH4+ 離子的偵測效果..............33
2.3.3 PAn/NF/CFE 的偵測效果.......................................34
2.3.4 偵測麩胺酸鹽電流訊號的再現性...........................35
2.4 結論...............................................................................37
第三章 聚苯胺麩胺酸脫氫酶修飾超微電極.....................38
3.1 前言...............................................................................38
3.2 實驗...............................................................................38
3.2.1 藥品與溶液配製......................................................38
3.2.2 儀器設備..................................................................39
3.2.3 聚苯胺/麩胺酸脫氫酶修飾電極之製備.................40
3.2.4 GLDH/PAn/NF/CFE 對麩胺酸鹽的催化反應及
偵測過程..............................................................41
3.3 結果與討論..................................................................45
3.3.1 GLDH/PAn/NF/GCE 的酵素固定.........................45
3.3.2 BSA 含量對偵測 Glutamate的影響.....................45
3.3.3 GA 含量對偵測 Glutamate 的影響......................46
3.3.4 GLDH 含量對偵測 Glutamate 的影響................47
3.3.5 NAD+ 含量對偵測 Glutamate 的影響.................48
3.3.6 載體流速對偵測 Glutamate 的影響.....................49
3.3.7 載體溶液 pH 最佳化的探討...................................50
3.3.8 GLDH/PAn/NF/GCE 的再現性對
電流訊號的影響......................................................52
3.3.9 麩胺酸標準溶液的偵測..........................................53
3.3.10 干擾物的影響.......................................................55
第四章 總結........................................................................56
第五章 參考文獻................................................................57
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